LA INDUCCION DE APOPTOSIS SECUNDARIA A LA INHIBICION DE LA ACTIVIDAD CINASA DEPENDIENTE DE BCR-ABL POR EL STI571 EN LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA SE DEBE A LA SUPRESION DE LA REGULACION POSITIVA DE BCL-XL MEDIADA POR STAT5
EJ Andreu, M Horita, A Benito, C Arbona, C Sanz, I Benet, J García-Conde, F Prósper, JL Fernandez-Luna. Hematología y Oncología, H Clínico Universitario, Valencia. Servicio de Inmunología, H Marques de Valdecilla, Santander
Las células de LMC se caracterizan por la presencia de la t(9;22) que resulta la generación del gen de fusión BCR-ABL y la síntesis de la proteína p210 con una actividad tirosina cinasa disregulada, lo que condiciona una resistencia aumentada a la apoptosis. El inhibidor de la actividad tirosina cinasa dependiente de p210, STI571 está siendo utilizado en el tratamiento de pacientes con LMC con resultados prometedores. El objetivo de nuestro trabajo ha sido estudiar mecanismos implicados en la inhibición de la apoptosis inducida por BCR-ABL en pacientes con LMC y el efecto del STI571 sobre células de pacientes con LMC en fase crónica y blástica. Células CD34 de pacientes con LMC en fase crónica y fase blástica, así como las líneas celulares K562 y MO7E trasducidas con p210 se cultivaron en presencia del inhibidor STI571. Se analizó la inducción de apoptosis por citometría de flujo, la expresión de Bcl-xL y la fosforilación de STAT5. Asimismo se determinó la regulación trascripcional de Bcl-xL mediada por STAT5 mediante ensayos de mobilidad retardada en gel. El STI571 indujo la apoptosis de las células CD34 de LMC pero mientras que la inducción de apoptosis en células de fase crónica fue máxima tras 48 horas a concentraciones de 20 ng/mL (> 70% apoptosis) las células CD34 de pacientes con fase blástica requirieron periodos de 96 horas para conseguir inducir apoptosis. El STI571 no tuvo efecto sobre células CD34+ de donantes sano. La incubación con STI571 indujo una inhibición de la actividad cinasa de BCR-ABL con inhibición de la fosforilación de STAT5 pero no de STAT1 o STAT3 y una regulación negativa de la expresión de Bcl-xL tanto en las líneas celulares como en las células de pacientes con LMC. Por medio de ensayos de unión de proteína a DNA (EMSA) pudimos demostrar que STAT5 se une al promotor de Bcl-xL y es responsable de su transcripción. La inhibición de BCR-ABL se asoció a una inhibición de la unión de STAT5 al promotor de Bcl-xL y de su trascripción y síntesis. En conclusión nuestros resultados describen una nueva ruta antiapoptótica inducida por BCR-ABL dependiente de la regulación positiva de Bcl-xL mediada por el factor trascripcional STAT5. Asimismo nuestros resultados demuestran que el STI571 es capaz de inducir apoptosis en células de LMC en fase crónica y blástica inhibiendo la activación de Bcl-xL mediada por STAT5. El efecto es mayor sobre células procedentes de pacientes en fase crónica.
Trabajo subvencionado en parte por el proyecto FIS 98/0863