EXPRESIÓN ESTABLE IN VIVO DE LA ENZIMA GLUCOSA-6-FOSFATO DESHIDROGENASA HUMANA (hG6PD) TRAS LA TRANSFERENCIA DEL GEN G6PD EN CÉLULAS PLURIPOTENCIALES HEMOPOYÉTICAS

A. Rovira*, M. De Angioletti, O. Camacho Vanegas, D. Liu, V. Rosti, H. Gallardo, C. Fein-Levy, R. Notaro, M. Sadelain, L. Luzzatto.

*Instituto de Biología Fundamental, Universidad Autónoma de Barcelona. Dept. Human Genetics, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, NY.

La terapia génica mediante la transducción de células madre pluripotenciales hemopoyéticas (CMPH) es una alternativa terapéutica para el déficit de G6PD severo, que cursa con anemia hemolítica crónica no esferocítica (ACHNE), por varios motivos: a) no existe un tratamiento específico; b) es causado por mutaciones puntuales en el gen G6PD (Xq28); c) sus manifestaciones clínicas se limitan principalmente a los eritrocitos; y d) las células requieren un nivel de enzima bajo. Se han transducido CMPH murinas con vectores retrovíricos que contienen el gen hG6PD y se trasplantaron en ratones singénicos previamente irradiados letalmente. El 72% de los 46 ratones trasplantados expresaron hG6PD en eritrocitos de sangre periférica como mínimo 3 meses; 18 ratones mostraron una expresión estable a lo largo de su vida, hasta 20 meses después del trasplante. Las CMPH de 10 receptores primarios (4-12 meses después del trasplante) se trasplantaron en 32 receptores secundarios: 28 de ellos expresaron hG6PD como mínimo 2 meses y el 61% mostró una expresión estable a lo largo de su vida (16 meses después del trasplante). De 6 receptores terciarios, 5 expresaron hG6PD. En los ratones con expresión estable se detectó hG6PD en todos los tejidos hemopoyéticos. En los eritrocitos la actividad G6PD total fue el doble que en los controles no trasplantados: este nivel de expresión está muy por encima del nivel que evitaría una hemólisis crónica. Con los mismos vectores se ha corregido el fenotipo deficiente severo de células murinas pluripotenciales embrionarias G6PD-nulas. Asimismo, se han transducido células humanas hemopoyéticas CD34+Lin-. Después de 6 semanas en cultivo, se obtuvo expresión de hG6PD en CMPH de donantes normales y de pacientes con déficit de G6PD, así como en células humanas hemopoyéticas trasplantadas en 5 ratones NOD/SCID previamente irradiados subletalmente.

Este ensayo preclínico demuestra la transducción de CMPH y la obtención de niveles de G6PD terapéuticamente efectivos. Actualmente las instituciones competentes están evaluando un protocolo para la corrección mediante retrovirus del déficit de G6PD severo asociado a ACHNE.