MODULACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE FACTOR TISULAR Y DE PAI-1 POR ÓXIDO NÍTRICO EN CULTIVOS DE CÉLULAS ENDOTELIALES EN PRESENCIA DE ENDOTOXINA
Pérez A1, López-Pedrera Ch2, Velasco F2, Orbe J1, Rodríguez-Wilhelmi P.1, Montes R1, Torres A2, Rocha E1,3
1Unidad de Investigación en Trombosis y Hemostasia, Universidad de Navarra, 2Unidad de Investigación, Servicio de Hematología, Hospital Universitario Reina Sofía, Córdoba, 3 Servicio de Hematología, Clínica Universitaria, Pamplona.
INTRODUCCIÓN
La hipotensión asociada a sepsis podría estar parcialmente inducida por una superproducción de óxido nítrico (NO), por lo que la administración de inhibidores de la óxido nítrico sintasa (NOS) podría revertir este efecto. Sin embargo, recientemente se ha sugerido que el NO podría mejorar el desequilibrio hemostático causado por la acción de la endotoxina (LPS), atenuando o disminuyendo la tendencia protrombótica inducida por el aumento de factor tisular (FT) y PAI-1.
OBJETIVO
Comprobar si la inhibición de la producción de NO o su aporte exógeno tienen como consecuencia el incremento o la disminución, respectivamente, de los niveles de PAI-1 y FT en cultivos de células endoteliales obtenidas a partir de cordón umbilical humano (HUVECs) en presencia de LPS.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se estimularon cultivos de HUVECs con LPS (50 ng/ml), LPS (50 ng/ml) más L-NAME (inhibidor de la NOS, 1 y 10 µM) y LPS (50 ng/ml) más SNAP (dador exógeno de NO, 0,05 y 0,1 µM). Se recogieron las células a las 0, 2, 6 y 24 horas para extraer el mRNA y determinar la expresión de FT y PAI-1 por RT-PCR. Así mismo, se recogieron los sobrenadantes de los cultivos a los mismos tiempos para la determinación de FT a partir de lisados celulares y del nivel antigénico de PAI-1 (PAI-1 Ag) por ELISA.
RESULTADOS
LPS produjo un aumento tanto en la expresión como en los niveles proteicos de las dos proteínas en estudio, más pronunciado en el caso de FT. Tras estimular los cultivos con LPS más L-NAME, se observó que el inhibidor de la NOS a 1 µM indujo un aumento de FT, tanto en mRNA como en proteína, especialmente a las dos horas (1410,3% vs 898,6% y 1520,5% vs 543%), mientras que con 10 µM fue la expresión del gen del PAI-1 la que experimentó un mayor aumento respecto a su control (146,8 % vs 127,8%). SNAP indujo, a ambas dosis, un descenso en el nivel antigénico y en la expresión de FT, a las dos, seis y 24 horas (se redujo a la mitad el incremento de la expresión de FT observado en el control a las dos horas). Se observó también un descenso en la expresión de PAI-1, menos pronunciado que en el caso de FT.
CONCLUSIÓN
El NO podría desempeñar un papel protector frente a la formación de trombos en la endotoxemia, atenuando el aumento de los niveles de FT y PAI-1.