CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE LOS LINFOCITOS B DE LA LEUCEMIA LINFÁTICA CRÓNICA COMO RESPUESTA AL EMPLEO COMBINADO DE MITÓGENOS.
R. Collado, M. Orero, H. Sánchez, C. Barelles, A. Miguel-Sosa, y F. Carbonell.
Servicio de Hematología. Hospital General Universitario, Valencia.
Los linfocitos B leucémicos responden débilmente a la mayoría de los factores de crecimiento utilizados en los cultivos, con la excepción del acetato de tetraforbol (TPA).Teniendo en cuenta que el crecimiento de cualquier población tumoral es una función no sólo del índice de proliferación sino también de su muerte, proponemos el cálculo del cociente entre el porcentaje de linfocitos B en fase de síntesis (fase S) y el porcentaje de apoptosis como estimación del crecimiento celular (ratio de crecimiento).
Objetivo: Cuantificar las variaciones producidas en el crecimiento de los linfocitos B en función del tiempo de incubación y composición de los cultivos.
Pacientes y métodos: En el estudio se emplearon muestras de sangre periférica de 16 pacientes con LLC-B. Se establecieron cultivos sin estimular y cultivos estimulados mediante combinaciones de mitógenos: TPA (50 ng/ml), TPA + IL-2 (20 ng/ml), TPA + FNT-a (40 ng/ml) y TPA + PWM (1 %). El cálculo de la fase S y la apoptosis a tiempo 0 y tras 3 y 5 días de incubación se realizó mediante citometría de flujo utilizando un doble marcaje CD19-FITC/ADN-Ioduro de propidio.
Resultados: La tabla muestra la media de los valores obtenidos ± la desviación típica.
Cultivo |
Ratio de crecimiento 3 días 5 días |
p (0-3 días) |
p(0-5 días) |
p(3-5 días) |
|||
TPA |
4.9 ± 7.6 |
0.9 ± 1.7 |
0.0004 |
0.03 |
0.0006 |
||
TPA + IL-2 |
5.9 ± 10.6 |
2.6 ± 5.0 |
0.0004 |
0.001 |
0.01 |
||
TPA + FNT- a |
5.7 ± 8.4 |
1.8 ± 3.7 |
0.0004 |
0.003 |
0.0005 |
||
TPA + PWM |
- |
1.0 ± 1.8 |
- |
ns |
- |
||
Sin estimular |
0.04 ± 0.06 |
0.1 ± 0.3 |
0.02 |
ns |
ns |
Conclusiones: 1.
Los linfocitos B obtienen su mayor ratio de crecimiento cuando utilizamos combinaciones del TPA con la IL-2 y el FNT-a en los cultivos de 3 días debido a un aumento significativo de la proliferación. 2. Cuando la incubación se prolonga a 5 días, el ratio de crecimiento disminuye independientemente del tipo de estimulación ya que se produce un incremento en los niveles de apoptosis. 3. La utilización de la IL-2, el FNT-a y el PWM no potencia de forma significativa los efectos mitogénicos del TPA.