PAPEL DE LA EXPRESION DE BCL-XL EN EL PROCESO DE DIFERENCIACION Y MADURACION MEGACARIOCITICA A PARTIR DE CELULAS CD34 DE CORDON UMBILICAL

I Benet, C Sanz, B Badia, C Richard, C Arbona, EJ Andreu, J Garcia-Conde, F Prosper, JL Fernandez Luna. Hematología y Oncología, H Clínico Universitario, Valencia y Servicio de Inmunología, H Marques de Valdecilla, Santander

  

La expresión de la proteína antiapoptótica Bcl-xL ha sido implicada en los procesos de maduración mieloide y eritrocitaria en celulas hematopoyéticas humanas. El objetivo de nuestro estudio fue determinar el papel de Bcl-xL en la proliferación y diferenciación de células hematopoyéticas hacia células de estirpe megacariocítica. Células CD34 de cordón umbilical se cultivaron in vitro en medio Iscove con la adición de trombopoyetina durante periodos de 7 a 21 días (Cultivo megacariocítico). A distintos intervalos de tiempo se procedió a recoger las células cultivas para estudiar la diferenciación megacariocítica por medio de citometría de flujo, la expresión de proteínas antiapoptóticas Bcl-2 y Bcl-xL por inmunohistoquimia y western blot. Asimismo se analizó el porcentaje de apoptosis en el cultivo megacariocítico por medio de ioduro de propidio. Como control se utilizó la línea celular UT-7 inducida hacia la diferenciación megacariocítica por medio de PMA. En aquellos casos en los que se requirió la obtención de una población pura de progenitores hematopoyéticos, las células cultivadas fueron inmunoseleccionadas con microesferas (Miltenyi) obteniéndose poblaciones con mas del 90% de células CD41+. El porcentaje de células megacariocíticas (CD41+ CD14-) fue de 5, 29, 59 y 39% a los días 0, 7 14 y 21 del cultivo. La expresión de la proteína Bcl-xL aumento de forma significativa tanto por western blot como por inmunohistoquimia en los progenitores megacariocíticos maduros sin que hubieran diferencias en la expresión de Bcl-2. En los estadios finales de la megacariocitopoyesis aparecen los megacariocitos senescentes, células en proceso de apoptosis. La expresión de Bcl-xL en los estadios mas tardios de la maduración, disminuyó significativamente junto con un aumento en el porcentaje de células megacariocíticas en apoptosis. Al analizar el contenido de Bcl-xL en las plaquetas pudimos determinar una importante expresión por western blot. En conclusión nuestros resultados sugieren que el proceso de diferenciación y proliferación megacariocítica está regulado al menos parcialmente por la expresión de la proteína proapoptótica Bcl-xL de tal forma que la regulación positiva de Bcl-xL se asocia con la maduración inicial existiendo una posterior disminución de Bcl-xL en los estadios mas avanzados de la maduración y un aumento de la apoptosis

Trabajo subvencionado parcialmente por FIS 98/0863