ESTUDIOS SOBRE LA ACTIVIDAD FIBIRNOLÍTICA DEL LCI ( leech carboxypeptidase inhibitor ) IN VITRO.

S.Salamanca, M.Borrell, J. Vendrell, X. Avilés

El LCI ( leech carboxypeptidase inhibitor ) es un inhibidor proteico de carboxipeptidasas, entre ellas el TAFI ( thrombin activatable fibrinolysis inhibitor ). El TAFI después de su activación por trombina ( Tr ) o trombina-trombomodulina ( Tr-Tm )inhibe la fibrinólisis mediante la proteólisis de los residuos lisina de la región C-terminal de la fibrina parcialmente degradada por la plasmina.La inhibición de la actividad carboxipeptidasa del TAFI podría tener efectos profibrinolíticos acelerando la lisis del coágulo.

Objetivo : Demostrar que el LCI puede, mediante su acción inhibidora de TAFI, ser un buen fibrinolítico, en un sistema in vitro.

Métodos : 1) Tiempo de lisis del coágulo : en una placa de microtitulación se añadió plasma , Tr o Tr-Tm (1.25u y 2.5u )y t-PA . La lisis del coágulo se siguió mediante lecturas a 405nm, cada 30 minutos, a lo largo de 400 min. Se calculó el tiempo de lisis del coágulo como vida media del tramo recto descrito por la curva de turbimidetria, en min.

2 )Determinación funcional del TAFI: se realizó la técnica descrita por Mosnier ( Tromb.Haemostas. 1998 ; 80 : 827-35) que consiste en activar el TAFI con Tr-Tm y determinar su actividad mediante el sustrato cromogénico Hyppuril-Arg.Actividad se expresa en % respecto a un pool de plasmas normales.

Resultados:1) tiempo de lisis expresado en min.2)Actividad funcional %

1.25 u Tr 2.5 u Tr 1.25 u Tr-Tm 2.5 u Tr-Tm

[LCI]nM 0 110 0 110 0 110 0 110

t lisis (min) 50 40 75 40 100 40 100 100

TAFI % act. 15 12 30 12 112 66 130 70

Conclusión: la presencia de LCI acelera la lisis del coágulo e inhibe la actividad del TAFI en plasma, por lo que podría ser un buen candidato para desarrollar un fármaco fibrinolítico.