CORRELACION ENTRE ANTICUERPO UNIDO A FVIII vs. TITULO BETHESDA Y CARACTERIZACIÓN DEL SUBTIPO DE IgG ANTI-FVIII EN PACIENTES CON HEMOFILIA A.
V. Cortina, J.M. Montoro, S. Haya, P. Casaña, J.A. Aznar.
Unidad de Coagulopatías Congénitas.
Hospital Universitario La Fe. Valencia.
Objetivo: evaluar en hemofílicos con inhibidor la relación entre su título Bethesda (TB) y la cantidad de anticuerpo unido a FVIII (AcFVIII) y caracterizar las subclases de IgG que se unen al FVIII. Este estudio que pretende profundizar en el conocimiento biológico de los inhibidores en Hemofilia A y su posible aplicación a los tratamientos de inmunotolerancia, forma parte de un protocolo multicéntrico de la SETH.
Materiales y métodos: para determinar la AcFVIII y estudiar la caracterización se utilizó la técnica ELISA sandwich, sensibilizando cada pocillo de la microplaca con Kogenate (Bayer) diluido a 15 UI/ml. Como control negativo (CN) se tomó plasma de un individuo sano. El tampón de dilución fue PBS, Tween 20 al 0,05% y albúmina bovina al 2% (PBST-BSA). Para trazar una curva que relacionase anticuerpo unido a FVIII con título Bethesda se empleó plasma de un paciente hemofílico con inhibidor (2050 BU/ml), llevado a 20 BU/ml en PBST-BSA y diluido en serie desde 1/5 hasta 1/640. En la caracterización, para cada subclase, se ensayaron cuatro blancos (PBST-BSA) y se calcularon sus respectivas medias y desviaciones estándar (SD). La presencia de una subclase de IgG fue positiva si la DO media de la muestra para esa subclase superaba la media de DO de sus cuatro blancos más 3 veces su SD. El CN siempre dio negativo.
Resultados:
Pacientes |
TB |
AcFVIII |
TB/AcFVIII |
IgG1 |
IgG2 |
IgG3 |
IgG4 |
1 |
6,4 |
10 |
0,64 |
+ |
- |
+ |
+ |
2 |
15,8 |
19 |
0,83 |
+ |
- |
- |
+ |
3 |
202,9 |
302 |
0,67 |
- |
- |
+ |
+ |
4 |
19,4 |
41 |
0,47 |
- |
+ |
- |
+ |
5 |
39,8 |
92 |
0,43 |
+ |
+ |
- |
+ |
6 |
17,0 |
17 |
1,00 |
+ |
- |
- |
+ |
7 |
3,6 |
8 |
0,45 |
+ |
- |
- |
- |
8 |
2,2 |
6 |
0,37 |
- |
- |
- |
+ |
Conclusiones
: existe una proporcionalidad clara entre la cantidad de AcFVIII y el TB (r = 0.992). La caracterización evidencia el dominio de IgG4 como subclase de inhibidor; a la vez que es frecuente la presencia de IgG1 y en menor medida de IgG2 y 3. Destacamos la aparición en exclusiva de un inhibidor IgG1en el paciente 7. Se puede afirmar que, en un paciente dado, el título Bethesda total sea la suma de los títulos parciales de las subclases de IgG que unen FVIII.